PAlA Biotech

抗体已经成为当代生物医药重点组成部分。而在抗体药物研发生产过程中，一种打破传统，更加高通量，更加快速的抗体滴度检测，抗体错配分析，抗体聚集程度检测，抗体糖基化分析，抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测，抗体多特异性检测，抗体胞饮作用检测方法的广泛应用，将极大的提高抗体行业的发展。PAlA Biotech基于其专有微孔板技术开发的系列检测试剂盒，正是这样一种打破传统的好产品。

PAIA biotech微孔板技术原理

我们以高通量抗体滴度筛选试剂盒为例，来进行PAlA Biotech的系列检测试剂盒原理说明。

PAlA Biotech在中间突起的孔里预先加入微球，微球上带有Fc结构。由于微孔板中间突起，因此在重力作用下微球位于孔板底部。向微孔中加入带有荧光集团的proteinA，然后加入样本，并进行混匀。样本中的抗体分子会和带有荧光集团的proteinA结合，并存在溶液中。而未被样本中抗体结合的proteinA分子将被带有Fc结构的微球结合，并沉淀于微孔底部。

透过微孔板底部进行荧光分析，基于荧光值得大小即可判定样本中抗体滴度的大小。

基于此原理，PAlA Biotech还开发了抗体错配分析、聚集程度检测、糖基化分析、表面疏水性检测、表面电荷检测、多特异性检测及胞饮作用检测系列试剂盒。这些基于微孔法的检测试剂盒，相对于传统的检测方法，通量更大、检测速度更快，并且可以兼容自动化系统，节省更多人力成本。

PAIA biotech产品应用介绍

应用场景一、PAIA biotech产品用于抗体滴度检测

检测原理：如上文介绍

传统抗体检测方法包括：

1. 酶联免疫吸附测定（ELISA）

·   原理：利用抗原-抗体的特异性结合，结合酶标二抗和显色反应，通过比色法检测抗体浓度。

·   优点：灵敏度高，适用于低浓度的抗体检测。

·   缺点：操作步骤繁琐，耗时长，洗涤和孵育时间较长，且结果易受实验人员操作的影响，难以实现高通量。

2. 高效液相色谱 (HPLC) - 蛋白A亲和色谱

·   原理：使用Protein A亲和色谱柱，通过抗体的Fc区与Protein A的结合特性分离和定量抗体。

·   优点：灵敏度高，特异性强，尤其适用于纯化过程中的抗体浓度检测。

·   缺点：设备昂贵，操作复杂，检测周期长，无法高通量操作。

3. 表面等离子共振（SPR）

·   原理：利用表面等离子共振技术，实时监测抗原-抗体结合的动力学变化，从而定量检测抗体滴度。

·   优点：可实时监测，数据稳定，能够测定结合动力学参数。

·   缺点：设备昂贵，操作复杂，样品用量大，难以高通量处理。

4. 电泳/Western Blot

·   原理：通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后用抗体与蛋白结合，并通过化学发光或显色系统检测抗体的存在。

·   优点：可分析抗体的分子量和结构信息，操作方法成熟。

·   缺点：无法精确定量，操作耗时，灵敏度不高，重复性差，难以高通量检测。

5. 紫外-可见分光光度计（UV-Vis）

·   原理：通过在280 nm处检测抗体溶液的吸光度（A280）来定量蛋白质浓度。

·   优点：快速、简单、无损伤，适用于大规模的在线监测。

·   缺点：特异性差，无法区分抗体与其他蛋白质，难以高通量操作。

6. 毛细管电泳（CE-SDS）

·   原理：通过电泳分离蛋白质，结合SDS，定量检测抗体浓度。

·   优点：高分辨率，可同时检测抗体的纯度和分子量。

·   缺点：仪器昂贵，操作复杂，无法高通量检测。

PAIA biotech与传统方法的对比总结

总的来说，其与传统方法相比，更快、更简便、效率更高，尤其适用于规模生产和GMP环境中的批量检测。

应用场景二、PAIA biotech产品用于抗体糖基化分析

检测原理：同样基于中间突起的微孔板，将样品（如抗体或糖蛋白）加入PAIA的微孔板中，孔内预包被了特异性糖结合分子（如凝集素），这些分子可特异性识别并结合到目标糖基（如甘露糖、半乳糖、唾液酸等）上。加入标记了荧光的二抗或其他荧光探针，特异性识别与目标糖基结合的分子。利用荧光读板仪读取荧光信号，荧光强度与样品中糖基的丰度呈正相关。

传统的糖基化检测方法包括：

1. 高效液相色谱-糖肽分析 (HPLC-Glycan Profiling)

·   原理：先对抗体进行酶解，释放出N-糖或O-糖后，使用荧光标记法标记糖基，再通过HPLC分离糖基，并检测其荧光信号。

·   优点：可以精确分析和定量目标糖基的组成和丰度，分离度高。

·   缺点：流程繁琐，操作复杂，通常需要1-2天才能完成，成本高，无法高通量处理。

2. 质谱检测 (LC-MS/MS, MALDI-TOF-MS)

·   原理：将抗体的糖基分离后，采用**液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）或基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）**检测糖基的质量和序列。

·   优点：可以提供高分辨率的糖基结构信息，能够区分同分异构体，精确度高。

·   缺点：设备昂贵，技术要求高，数据解析复杂，无法大规模高通量筛选，检测周期长（通常2-3天）。

3. 毛细管电泳 (CE-LIF) - 荧光标记糖基法

·   原理：将糖基通过荧光标记后，利用毛细管电泳在电场中分离糖分子，使用激光诱导荧光（LIF）检测信号。

·   优点：灵敏度高，分析速度快，分离度高。

·   缺点：设备成本高，方法复杂，通常需要1天或更长时间，无法高通量操作。

4. 凝集素芯片（Lectin Array）

·   原理：利用凝集素（如ConA、WGA等）对糖基的特异性识别和结合，将这些凝集素固定在芯片上，通过荧光检测样品中的糖基化特征。

·   优点：能够多重检测多种糖基化修饰，并可一次性分析多个样品中的多种糖基类型。

·   缺点：设备和试剂成本高，数据解释复杂，灵敏度低于质谱，无法量化特定的糖基数量。

5. ELISA方法（Enzyme-Linked Lectin Assay, ELLA）

·   原理：在ELISA板中包被目标糖基，加入抗体，随后通过特异性抗糖基抗体和酶联反应显色，最终通过比色法检测样品中糖基的含量。

·   优点：方法成熟、成本低、特异性高，适用于定量检测。

·   缺点：灵敏度较低，无法检测低丰度糖基修饰，操作流程复杂，检测时间长（4-6小时），且难以高通量。

PAIA biotech与传统方法的对比总结

总的来说，PAIA的微孔平台通过高通量、快速和免洗的检测技术，在糖基化检测中表现优异。与HPLC、质谱和毛细管电泳等传统方法相比，PAIA的速度更快、成本更低、操作更简单，尤其适用于生产环境和大规模筛选。

应用场景三、PAIA biotech产品用于抗体错配检测

PAIA biotech产品用于抗体错配检测的原理

在生物制药和抗体药物开发过程中，抗体错配（mismatch）是一个常见的问题，尤其在抗体筛选、生产和质控阶段。

PAIA biotech的试剂盒，同样借助中间突起的微孔板，基于在不同的PH的情况下，错配和正确配对的抗体，他们对离子交换磁珠的结合能力是不同的为原理，因此会显示出不同的荧光读数量，依次判定样本中抗体的错配情况。

传统的抗体错配检测方法

传统方法主要包括ELISA（酶联免疫吸附法）、HPLC（高效液相色谱法）和SPR（表面等离子共振法）等技术。每种方法的检测原理和操作流程各不相同，具体如下：

1. ELISA（酶联免疫吸附法）

·   原理：ELISA利用抗原-抗体的特异性结合反应，在微孔板上对抗体的结合能力进行检测。通常，靶抗原会被固定在微孔板的底部，当加入抗体样品后，特定的抗体会与抗原结合。为了检测这种结合反应，加入与抗体结合的标记二抗（通常是HRP标记的二抗）。通过加入底物（如TMB溶液）并在特定条件下显色，显色强度与结合的抗体数量成正比。

·   操作流程：包被抗原 → 封闭 → 加入样品 → 加入二抗 → 显色反应 → 终止反应 → 读板检测。
·   优点：灵敏度高、操作设备简单，适用于大规模样品筛选和质控检测。
·   缺点：操作步骤繁琐，检测时间较长（3-5小时），需要多次洗涤，容易出现假阳性或假阴性。

2. HPLC（高效液相色谱法）

·   原理：HPLC是一种基于分子尺寸、极性或电荷差异的分离检测技术。样品在高压泵的推动下通过固定相填充的色谱柱，不同成分因物理化学特性的不同，在色谱柱中被分离。HPLC可以分离和检测不同的抗体亚型、抗体聚集体和杂质等，从而区分抗体错配现象。
·   操作流程：样品前处理 → 进样 → 通过色谱柱分离 → 通过检测器检测（如紫外/荧光检测器） → 数据记录与分析。
·   优点：灵敏度高，适用于检测抗体分子量、纯度、聚集体及其结构差异。
·   缺点：操作复杂，样品前处理繁琐，检测时间较长（2-4小时），设备成本高，难以实现高通量检测。

3. SPR（表面等离子共振法）

·   原理：SPR是一种实时监测分子间相互作用动力学的技术，基于光在金属界面反射时的表面等离子体共振现象。检测时，将一种分子（如抗原）固定在金属表面，另一种分子（如抗体）通过流动样品与之结合。分子结合引起表面折射率的变化，SPR传感器记录到的共振角变化与分子结合的数量成正比，从而监测到结合的抗体。
·   操作流程：抗原固定 → 流动样品（抗体）注入 → 动态实时监测分子结合情况 → 数据记录与分析。
·   优点：实时检测、动态监测，灵敏度高，能提供结合动力学数据（如Ka、Kd）。

·   缺点：成本高，设备昂贵，操作复杂，通常单次只能检测一个样品，难以高通量操作。

PAIA biotech检测试剂盒与传统方法的对比总结

总的来说，PAIA Biotech的检测技术在高通量、快速、简单操作等方面具有显著优势，特别适合用于大规模的抗体错配检测。与传统的ELISA和HPLC方法相比，PAIA检测缩短了检测时间，降低了操作复杂性，并且对高通量的抗体筛选和生产环境更加友好。

应用场景四、PAIA biotech产品用于抗体聚集分析

抗体聚集体的产生可能会影响药物的安全性、稳定性和有效性。抗体药物开发，质量控制（QC），工艺优化流程都需要进行抗体聚集检测分析。

PAIA biotech产品用于抗体聚集检测原理

PAIA Biotech的抗体聚集检测采用了荧光微孔板检测技术，其核心原理是利用特异性配体（如捕获抗体或结合分子）在微孔板中捕获抗体聚集体，并通过荧光标记的二抗对其进行可视化检测。将抗体样品加入特定配体包被的微孔板中，聚集体会优先与捕获分子结合，入荧光标记的二抗，二抗与捕获的抗体聚集体结合，产生可检测的荧光信号，荧光检测仪对每个孔的荧光强度进行读取，荧光强度的高低与抗体聚集体的数量成正比。

传统的抗体聚集分析方法及其局限性

传统的抗体聚集检测方法主要包括SEC-HPLC（凝胶过滤色谱法）、DLS（动态光散射）和AUC（分析超速离心）等。这些方法的原理和检测特点如下：

1. SEC-HPLC（凝胶过滤色谱法）

·   原理：SEC-HPLC利用抗体分子的分子大小差异进行分离，较大的分子（聚集体）会更早从色谱柱中流出，而较小的单体则滞后流出，从而实现分离和检测。
·   局限性：

1）检测速度慢，通常每个样品检测需要30分钟到1小时。

2）样品前处理复杂，需要脱气、过滤等操作，增加了人力成本。

3）高压操作可能破坏天然的抗体聚集体，造成检测偏差。

2. DLS（动态光散射）

·   原理：DLS是通过分析样品中颗粒的布朗运动速率，计算出颗粒的粒径分布。抗体聚集体的体积比单体更大，光的散射强度也更高，因此可通过散射信号区分抗体单体和聚集体。
·   局限性：

1）对高浓度样品不敏感，高浓度的蛋白溶液容易引发多重散射效应，导致数据不准确。

2）只适用于检测较大的颗粒，无法区分微小的抗体二聚体或寡聚体。

3）只能测量体积信息，无法获得抗体的定量信息。

3. AUC（分析超速离心）

·   原理：AUC通过在高离心力下将样品中不同质量的分子分离，抗体单体、二聚体和更高聚集体会分离成不同的带。
·   局限性：

1）检测设备昂贵，操作复杂，通常需要经过专门培训的人员操作。

2）检测过程耗时长达6-8小时，不适合高通量分析。

3）只能在低样品通量下操作，无法应对大规模样品检测需求。

PAIA Biotech的抗体聚集检测优势

与传统的抗体聚集分析方法相比，PAIA Biotech的检测方案在速度、成本和通量方面具有较大优势。

·   检测速度快：与SEC-HPLC和AUC相比，PAIA检测通常在1小时内完成，可大幅缩短检测时间。

·   高通量检测：PAIA检测平台支持96孔和384孔板，实现批量检测，而SEC-HPLC和AUC只能单样品逐一检测。

·   无需洗涤，自动化程度高：PAIA检测过程不需要洗涤步骤，自动化平台可快速操作，节省人力和时间成本。

·   灵敏度高：可检测到pg/mL级别的抗体浓度，尤其适用于早期药物筛选和大规模质控。

·   简单的设备要求：与SPR和AUC所需的昂贵设备不同，PAIA只需标准的荧光微孔板检测仪，维护成本低、便于操作。

PAIA biotech检测试剂盒与传统方法的对比总结

PAIA Biotech的抗体聚集检测优势

与传统的抗体聚集分析方法相比，PAIA Biotech的检测方案在速度、成本和通量方面具有较大优势。

·   检测速度快：与SEC-HPLC和AUC相比，PAIA检测通常在1小时内完成，可大幅缩短检测时间。

·   高通量检测：PAIA检测平台支持96孔和384孔板，实现批量检测，而SEC-HPLC和AUC只能单样品逐一检测。

·   无需洗涤，自动化程度高：PAIA检测过程不需要洗涤步骤，自动化平台可快速操作，节省人力和时间成本。

·   灵敏度高：可检测到pg/mL级别的抗体浓度，尤其适用于早期药物筛选和大规模质控。

·   简单的设备要求：与SPR和AUC所需的昂贵设备不同，PAIA只需标准的荧光微孔板检测仪，维护成本低、便于操作。

应用场景五、PAIA biotech产品用于抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测，抗体多特异性检测，抗体胞饮作用检测

PAIA biotech同样基于荧光微孔板检测技术，开发了抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测，抗体多特异性检测，抗体胞饮作用检测系列试剂盒。我们以抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测为例，进行相关产品介绍。

抗体表面疏水性检测

首先抗体表面疏水性检测方面，抗体表面疏水性的评估对于预测抗体的聚集风险、稳定性和可开发性至关重要。传统的检测方式有反相高效液相色谱（RP-HPLC），表面等离子体共振（SPR），疏水相互作用色谱（HIC, Hydrophobic Interaction Chromatography）等。与传统方式相比，PAIA biotech产品具有如下优点：

·   高通量：

1）支持96孔/384孔板操作，一次可同时检测数十至上百个抗体样品。

2）与传统的HPLC、SPR、HIC方法相比，检测速度更快，适合大规模的抗体库筛选。

·   快速检测，1小时内完成：

传统HPLC和HIC方法需要几个小时，而PAIA方法在1小时内即可完成检测，节省时间成本。

·   无需复杂仪器，操作简单：

不需要使用HPLC、SPR等昂贵的精密仪器，只需普通的荧光检测仪，大大降低了设备和维护成本。

·   无洗涤操作，节省人力：

传统的疏水性检测（如HIC）需要多步洗涤和洗脱，而PAIA的检测方案不需要洗涤操作，大大减少了操作步骤和人工干预。

·   检测灵敏度高，结果稳定：

与传统的ANS荧光染料法相比，PAIA的荧光标记技术更加敏感，能够检测到更小的疏水性差异，结果可重复性更高。

·   样品用量少，节约成本：

PAIA的检测中，每孔的样品需求量非常少（仅需10-50 μL），与SPR和HIC等高样品需求的传统技术形成对比，降低了检测成本。

·   适合抗体开发中的早期筛选：

在候选抗体的开发过程中，PAIA的高通量检测能力帮助筛选疏水性较低的抗体变体，减少后续的聚集风险。

抗体表面电荷检测

抗体表面电荷检测方面，抗体表面电荷同样是影响抗体稳定性、可溶性和药代动力学特性的关键因素。电荷的变化可能导致聚集、吸附和效价下降。

传统的抗体表面电荷检测方法包括等电聚焦电泳（IEF, Isoelectric Focusing），毛细管区带电泳（CZE, Capillary Zone Electrophoresis），离子交换色谱（IEC, Ion Exchange Chromatography）等

与传统方式相比，PAIA biotech产品具有如下优点：