抗体应用

免疫组织化学 （IHC）、免疫细胞化学 （ICC-IF） 和蛋白质印迹 （WB） 是用于可视化组织或细胞内蛋白质的成熟技术。这些方法提供了对不同生物样品中蛋白质水平、位置和分布的见解。

ChIP-exo 测序 （ChIP-exo seq） 是一种先进的高分辨率方法，用于以单碱基精度绘制蛋白质-DNA 相互作用图谱。它使研究人员能够精确定位转录因子和其他 DNA 相关蛋白的确切结合位点，为基因组内的调控机制提供新的视野。

通过在这些不同的应用中验证Atlas Antibodies 的抗体，确保它们为您的研究提供可靠和高质量的结果，从蛋白质定位到基因组结合位点分析。

免疫组织化学 （IHC）

免疫组织化学 （IHC） 是组织病理学中用于检测组织和细胞中蛋白质的重要工具。它使用抗体来识别组织样本中特定蛋白质的存在和位置，使其在诊断和研究中都是必不可少的。

Triple A 多克隆抗体和 PrecisA 单克隆抗体通过对组织微阵列 （TMA） 形式的福尔马林固定、石蜡包埋 （FFPE） 组织进行 IHC 染色进行验证。

IHC 是一种定性技术，因此我们技术娴熟的团队会进行彻底的手动分析，以确保抗体在人体组织中具有特异性。

为了进行全面的蛋白质表达谱分析，对 144 名个体（代表 44 种组织类型）的正常组织和 216 名患者的癌组织（包括来自 20 种最常见癌症的重复肿瘤样本）进行了抗体检测。

对每种抗体共对 576 个组织核心进行免疫染色和分析。癌组织包括高级别和低级别恶性肿瘤。仔细评估染色强度、定位和染色细胞的比例，并为每个组织手动注释。

IHC中的增强验证

为了进一步验证特异性，我们通过特定应用的增强验证扩展了对抗体进行的验证。在 IHC 中，可以应用两种不同的增强验证方法：
1.正交验证（使用非基于抗体的方法进行验证）

2.独立抗体验证（两种抗体靶向同一蛋白质，但与蛋白质的不同部分结合，从而相互验证）

目前，超过 5,000 种抗体使用这两种增强型验证方法中的至少一种进行了验证。详细了解以下方法。

IHC 实验步骤 - Ventana Discovery XT

脱蜡

将 4 μm 厚度的石蜡切片在 50°C 下烘烤过夜。 脱蜡步骤在 Ventana Discovery XT 平台中使用 EZ prep 溶液完成。

标准抗原修复方法

标准抗原修复方法是在 95°C 下在 pH 7.8 的 Tris-EDTA 缓冲液中进行热诱导表位修复 （HIER） 44 分钟（标准 CC1），并在 Ventana Discovery XT 中进行。
如果未达到预期结果，请在其他时间进行测试，或者使用基于柠檬酸盐的缓冲液 pH 6.0 或蛋白酶抗原修复。

阻塞步骤

为了封闭内源性过氧化物和蛋白质，这些步骤在 Ventana Discovery XT 平台中使用抑制剂 CM 完成。

IHC 染色方案 Ventana Discovery XT

步骤之间的洗涤缓冲液是反应缓冲液。应用 100 μl 体积的一抗和二抗。

1.组织样本，石蜡。

2.在 EZ prep 75°C 中脱蜡 8 分钟。

3.使用调节剂 #1，标准 CC1,95°C 44 分钟进行细胞调节。

4.用抑制剂 CM 封闭，37°C 4 分钟。

5.无热量。

6.与一抗孵育 60 分钟。

7.滴入一滴 OmniMap 抗 Rb HRP 并孵育 16 分钟。

8.滴入一滴 OmniMap 抗 Ms HRP 并孵育 16 分钟。

9.滴一滴 DAB CM 和一滴 H2O2 CM，孵育 8 分钟。

10.滴入一滴铜 CM，孵育 5 分钟。

11.用苏木精复染，孵育 8 分钟。

12.用 Bluing 试剂进行复染后，孵育 8 分钟。

13.玻片清洁。

14.用含有清洁剂的温自来水中清洗载玻片，并在分级乙醇和二甲苯中脱水。将玻片盖在永久性封固剂中。

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