具有绿色荧光蛋白的 1 型人副流感病毒（PIV1-GFP）

产品简介：人类副流感病毒 1 型 （PIV1） 是婴幼儿严重呼吸道疾病的重要原因。PIV1 是一种有包膜、无节段、单链、负义的 RNA 病毒，属于副粘病毒科副粘病毒亚科，该亚科还包括 PIV2 和 PIV3 血清型。这些血清型可进一步分类为属于呼吸病毒（PIV1 和 PIV3）或风疹病毒 （PIV2） 属，并且在免疫学上不同，因为原发感染不会导致交叉中和或交叉保护。PIV1基因组编码三种核衣壳相关蛋白，包括核衣壳蛋白（N）、磷蛋白（P）和大聚合酶（L）和三种包膜相关蛋白，包括内部基质蛋白（M）和融合蛋白（F）和血凝素-神经氨酸酶（HN）跨膜表面糖蛋白。F和HN是两种病毒中和抗原，是主要的病毒保护性抗原。此外，PIV1 的 P/C 基因包含第二个开放阅读框，该阅读框编码四种辅助 C 蛋白 C、C'、Y1 和 Y2，它们从四个独立的翻译起始密码子开始，并且是羧基共末端。PIV 引起呼吸道疾病，从轻度疾病（包括鼻炎、咽炎和中耳炎）到严重疾病（包括哮吼、细支气管炎和肺炎）。目前，任何PIV都没有获得许可的疫苗。

毒株构建方法：PIV1-GFP 是基于野生型生物衍生的人类 PIV1 菌株 Washington/20993/1964 创建的。将GFP基因（EGFP，Clontech;750 nt）作为第一个基因插入N基因上游的MluI位点，利用反向遗传学技术挽救重组PIV1-GFP病毒。使用 LLC-MK2 细胞通过连续两轮末端稀释克隆回收的病毒，然后在 LLC-MK2 细胞中繁殖。PIV1-GFP在感染细胞中表达GFP，无需血吸附或免疫染色即可检测感染的培养物。发现PIV1-GFP含有自发突变C：R84G（C基因氨基酸位84处的R-G突变）和HN：T553A（HN基因553位T-A突变）。发现PIV1-GFP在细胞培养物中的复制与其生物衍生的亲体病毒相似，但在猴子的呼吸道中略有减弱。