具有萤火虫荧光素酶的呼吸道合胞病毒 （RSV-Luc5）

产品简介： 作为第二代重组 RSV（包括 RSV-GFP5 （产品 #R125）、RSV-DsRed5 （#R135） 和 RSV-FarRed5 （#R155） 的补充，RSV-Luc5 被创建用于表达萤火虫荧光素酶（Luc）（Promega），是较常用生物发光报告基因。选择P和M基因之间的位置进行Luc插入，因为它将外源基因很好地放置在NS1和NS2基因的下游，避免了对NS1和NS2表达的直接影响。为了构建报告基因的转录盒，之所以选择G基因末端信号，是因为它是这些信号中有效的信号之一，并且对病毒转录程序的影响最小；基因起始信号更为保守，N的起始信号是典型的，并被使用。RSV-Luc5 适合需要精确定量的研究。

毒株构建方法：基于 RSV 菌株 A2 的野生型亲本被修饰为从放置在 P 和 M 基因之间的基因盒中表达萤火虫荧光素酶（Promega）。对萤火虫荧光素酶基因的开放阅读框（ORF）进行PCR扩增，在ORF上游增加一个ClaI位点和一个RSV基因起始（GS）信号（来自N基因），在ORF下游增加一个RSV基因末端（GE）信号（来自G基因）和SalI位点。在全长 RSV cDNA 质粒中，通过多个步骤在 P 和 M 基因之间进一步克隆 ClaI-SalI 片段。通过用全长抗基因组质粒和表达 N、P、L 和 M2-1 基因的质粒转染表达 T7 聚合酶的 BSR T7/5 细胞来挽救重组 RSV-Luc5。回收的RSV-Luc5在HEp-2细胞中进一步增殖，通过生物发光法证实了感染细胞对萤火虫荧光素酶的表达，并完整确认了病毒的序列。研究发现，RSV-Luc5 在细胞培养物中的复制效率与其生物亲本菌株一样有效。