具有绿色荧光蛋白的人呼吸道合胞病毒 （RSV-GFP1）

产品简介：人类呼吸道合胞病毒（RSV）是一种有包膜的、非分段的、负义的、单链 RNA 病毒，属于肺病毒亚科的肺病毒属，即副粘病毒科。呼吸道合胞病毒（RSV）是导致全球婴幼儿急性和严重下呼吸道疾病的最常见病毒。尽管呼吸道合胞病毒（RSV）疾病负担沉重，但目前还没有有效的疫苗或抗病毒药物治疗。RSV 基因组（15.2 kb）包含10个 mRNA，编码11种蛋白质。核衣壳（N）蛋白结合负链 RNA 基因组，并与磷蛋白（P）、大（L）聚合酶蛋白和 M2-1 蛋白结合形成核衣壳。基质（M）蛋白存在于核衣壳和外膜之间，在病毒粒子组装和出芽中起结构作用。有三种包膜糖蛋白：附着糖蛋白（G）、融合（F）蛋白和小疏水（SH）蛋白。基因组还编码两种非结构蛋白（NS1、NS2），前者抑制干扰素反应，后者控制基因组RNA从转录到复制的过渡。

毒株构建方法：为了构建 RSV-GFP1，GFP（Green Lantern Protein，Life Technologies）被设计为位于 RSV 基因起始和基因末端序列的两侧，并作为第一个启动子-近端基因插入野生型 RSV 菌株 A2 抗基因组 RNA 的全长 cDNA 中。RSV-GFP1 是通过将 HEp-2 细胞与抗基因组质粒和 N、P、M2-1 和 L 支持质粒共转染并用表达 T7 RNA 聚合酶的修饰牛痘病毒 MVA-T7 感染它们来挽救的。将获救的病毒在 HEp-2 细胞中扩增，分装并储存在 -80°C 下。 在细胞培养物中，发现 RSV-GFP1 复制到近亲本滴度，并以与亲本病毒相似的速率产生合胞体。使用这种病毒，发现RSV的主要靶细胞类型是人类气道中的纤毛上皮细胞（图）。