AMPK Phosphorylation Assay Kit (Fluorometric) (BA0075)

产品类型：测定

检测方法：荧光

仪器：酶标仪

样品类型：细胞、组织

研究领域：植物与环境压力

产品介绍

5-AMP激活的蛋白激酶（AMPK）是细胞内能量平衡的关键感应器。AMPK在响应AMP/ATP比率增加时被激活，这可能由多种因素引起，如肌肉收缩、饥饿或缺氧。AMPK是一个由α-（63 kDa）、β-（38 kDa）和γ-（38 kDa）亚基组成的异源三聚体蛋白复合物。对于每个亚基，已经鉴定出亚型（α1, α2, β1, β2, γ1, γ2, γ3），理论上允许形成12种不同的蛋白。α亚基包含一个丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，调节亚基包含AMP和ATP（γ亚基）以及糖原（β亚基）的结合位点。

AMPK通过在催化结构域内的Thr-172位点的磷酸化而被激活。AMP的结合导致AMPK活性比基础水平增加2到5倍。AMP与γ亚基的结合导致激酶的变构激活，并引起激酶结构域的构象变化，从而保护AMPK免受Thr172的去磷酸化。Assay Genie基于细胞的酶联免疫吸附测定（ELISA）测量整个细胞中的磷酸化AMPK，并将信号标准化到总蛋白含量。该抗体识别α亚基，因此可用于所有组织（人类、小鼠、大鼠）的细胞。这种简单高效的检测方法消除了细胞裂解制备的需要，并且可用于短期和长期检测AMPK的调节。在此检测中，细胞在96孔板中生长，固定和渗透在孔中。使用荧光ELISA测量AMPK磷酸化（pAMPK），然后在每个孔中测量总蛋白。

特点

·   全新改进：总检测时间从典型的9小时减少到5小时

·   简单：无需细胞裂解。细胞可以直接在96孔板中培养

·   方便：同一样本中可以测量总蛋白和pAMPK

应用

·   测定整个细胞中的AMPK磷酸化状态

·   评估AMPK磷酸化的直接和间接调节

·   已测试物种：人类、小鼠、大鼠

试剂盒内容

·   10倍洗涤缓冲液：25 mL

·   封闭缓冲液：25 mL

·   蛋白染色剂：6 mL

·   HRP底物：6 mL

·   pAMPK抗体1（pAMPK-Ab1）：10 µL

·   HRP标记的二抗（HRP-Ab2）：10 µL

存储条件：试剂盒在冰上运输。送达后，将所有试剂存放在-20°C。收到后保质期为6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应采取正常的实验室试剂预防措施。